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Air Max 1 Black endogene Qui si segnala che si

Air Max 1 Black

Alto livello di espressione ricombinante della proteina chinasi nelle cellule eucariotiche o Escherichia coli dà comunemente prodotti che sono fosforilati dagli autocatalisi o per l'azione di Air Max 2014 chinasi endogene. Qui, Air Max 1 Black si segnala che si è verificato fosforilazione sui residui di serina adiacenti per tag hexahistidine di affinità (suo-tag) derivate da diversi vettori di espressione commerciale e fusi di chinasi sovraespresse. Il risultato è stato osservato con una varietà di chinasi ricombinanti espresse sia in cellule di insetto o di E. coli. Molteplici fosforilazione di His-tag integrale Aurora A, una proteina chinasi serina / treonina, sono stati rilevati mediante spettrometria di massa quando è stato espresso in cellule di insetto in presenza di acido okadaico, un inibitore della proteina fosfatasi. Mappatura peptidica da cromatografia-spettrometria di massa liquida rilevato fosforilazioni su tutti e tre residui di serina in un tag N-terminale, α-N-acetil-MHHHHHHSSGLPRGS. La stessa sequenza era fosforilata, ma solo a un livello basso, quando un His-tag proteina tirosina chinasi, Pyk2 era espresso in cellule di insetto e attivato in vitro. Quando domini catalitici di Aurora A e diverse altre proteine ​​serina / treonina chinasi sono stati espressi in E. coli, serine nei GSSHHHHHHSSGLVPRGS sequenza di tag affinità erano anche variabile fosforilata. La sua Aurora-A con iperfosforilazione dei residui di serina nel tag aggregati e resistette rimozione trombina-catalizzata del tag. Il trattamento con fosfatasi alcalina sensibilità di trombina in parte restaurato. La stessa sequenza His-tag è stato rilevato anche il cuscinetto α-Nd-gluconoylation oltre a più fosforilazione. I risultati mostrano che le sequenze istidina-tag possono ricevere complicata modificazione post-traslazionale, e che la iperfosforilazione e conseguente eterogeneità delle proteine ​​di fusione ricombinanti possono interferire con le applicazioni a valle.
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